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    如何將腺病毒載體將基因有效轉移到小鼠胚胎干細胞中

    標簽:胚胎干細胞

    胚胎干細胞源自發育中的胚泡的內部細胞團,它們會產生在成年生物中發現的所有細胞類型,胚胎干細胞可以作為可移植的組織特異性干細胞的可再生來源,然而,盡管胚胎干細胞在發育生物學中很重要,并且對再生醫學具有潛在的影響,但對胚胎干細胞中控制其獨特特性(例如其自我更新能力和多能性)的信號傳導途徑知之甚少。在小鼠胚胎干細胞中,白血病抑制因子(LIF)/信號轉導子和轉錄激活因子3(STAT3)是自我更新的獨特特征明確的信號通路,然而,LIF胞或多種m胚在人類胚胎干細胎干細胞系中均不是需要的,這表明其他信號傳導途徑可導致胚胎干細胞自我更新。胚胎干細胞遺傳操作技術的缺乏可能是目前對它們有用性的局限。


    胚胎干細胞


    電穿孔方法逆轉錄病毒載體,慢病毒載體,以及基于復制系統的轉染方法,其中使用了多瘤病毒復制起點和大T抗原盡管慢病毒載體已被證明在小鼠胚胎干細胞中不能表達外源基因,但在人或猿猴胚胎干細胞中卻不能表達外源基因,但已被用于胚胎干細胞中的外源基因表達,在電穿孔和超轉染方法中,使用抗藥性基因選擇基因修飾的穩定細胞,而在逆轉錄病毒和慢病毒載體的情況下,將外源基因引入染色體,因此,所有這些方法都介導了長期組成型基因表達。


    但是,如果用于治療應用中,長期的基因表達系統可能會出現問題,因為即使在細胞分化后,這種系統中的基因也會連續表達,因此,仍然需要用于瞬時表達的有效載體系統,通過使用這樣的系統,可以用對其分化至關重要的基因(例如HoxB4)轉染胚胎干細胞,該基因已牽涉到定型造血干細胞(HSC)的自我更新,腺病毒(Ad)載體已被廣泛用于在體外和體內將外源基因傳遞給多種細胞類型,類型5(Ad5)在細胞表面需要柯薩奇病毒和腺病毒受體(CAR)作為感染的主要受體,并且其基因組在宿主細胞中游離存在。


    Ad載體顯示瞬時基因表達,在某些情況下,特別是與治療用途有關的情況下,其優于組成型表達。盡管Ad載體在基礎研究和基因治療中具有重要意義,但關于Ad載體介導的基因轉移至胚胎干細胞的信息很少,在這里,我們描述了在m胚胎干細胞中表達外源基因的合適Ad載體的構建,為了確認Ad載體可用于基礎研究,我們測試了使用三種不同基因控制細胞分化的可能性:Oct-3 / 4,它與胚胎干細胞的多能性有關[21]; NANOG,這對于胚胎干細胞的自我更新也至關重要和STAT3F,它是STAT3的顯性陰性突變體,能夠抑制LIF / STAT3信號傳導


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    2019-01-13

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